細菌在顯微鏡下被計數和觀察，通常采用的是顯微鏡直接計數法，這種方法借助血細胞計數板或細菌計數板等特制的計數工具，在顯微鏡下直接觀察和計數細菌。以下是細菌在顯微鏡下被計數和觀察的具體步驟和原理：

一、原理

顯微鏡直接計數法利用血細胞計數板或細菌計數板上的精確刻度和容積，將小量待測樣品的懸浮液置于計數板上的計數室內，于顯微鏡下直接計數細菌。這種方法直觀、快速，操作簡單。

二、步驟

制備細菌懸液：

取適量細菌樣品，用無菌生理鹽水或其他適當的緩沖液稀釋至適當濃度，以便在顯微鏡下清晰觀察。

加樣：

將清潔干燥的血細胞計數板或細菌計數板蓋上蓋玻片，用無菌吸管或滴管將稀釋好的細菌懸液滴加在計數板的一側，使菌液靠毛細作用自動進入計數室。

顯微鏡觀察：

將計數板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡找到計數室所在位置，然后轉換成高倍鏡進行計數。

調節顯微鏡的光線和焦距，使菌體和計數室線條清晰可見。

計數：

在顯微鏡下計數計數室內的細菌數量。通常選取計數室中的幾個中方格（如5個中方格）進行計數，然后計算出每個中方格的平均細菌數。

根據計數板的規格（如每個大方格包含多少個小方格）和樣品的稀釋倍數，計算出原液中每毫升所含的細菌數。

三、注意事項

樣品處理：在制備細菌懸液時，要確保樣品的稀釋倍數適當，以便在顯微鏡下清晰觀察細菌。如果菌液過濃，可能會導致細菌重疊計數；如果菌液過稀，則可能難以找到細菌。

計數準確性：在計數時，要確保每個細菌都被清晰觀察到，避免漏計或重復計數。對于位于方格線上的細菌，通常只計數相鄰兩邊及其夾角上的細菌。

顯微鏡調節：在觀察過程中，要適時調節顯微鏡的光線和焦距，以獲得最佳的觀察效果。

四、觀察技巧

染色觀察：為了更清晰地觀察細菌的形態和結構，可以對細菌進行染色處理。常用的染色方法包括革蘭氏染色、吉姆薩染色等。染色后，細菌的形態和結構會更加明顯，有助于準確計數和觀察。

使用油鏡：對于較小的細菌，可以使用顯微鏡的油鏡（高倍鏡）進行觀察。油鏡的放大倍數更高，分辨率更好，能夠更清晰地觀察細菌的形態和結構。

五、其他方法

除了顯微鏡直接計數法外，還有其他一些方法可以用于細菌的計數和觀察，如稀釋涂布平板法、光電比濁法等。這些方法各有優缺點，可以根據實驗目的和條件選擇合適的方法。

概括起來，細菌在顯微鏡下被計數和觀察是一個細致且系統的過程，需要掌握正確的操作方法和觀察技巧。通過顯微鏡直接計數法，可以準確、快速地獲得細菌的數量和分布信息。