顯微動態觀察細胞形態、運動和分裂過程并進行分析,對于理解細胞生物學機制、疾病發生發展以及藥物研發等具有重要意義。以下是相關內容介紹:
觀察方法與技術
熒光標記技術:利用基因編碼技術將熒光蛋白與細胞分裂相關蛋白結合,或選用能與細胞結構或特定分子結合的熒光染料進行染色,如用紅色熒光蛋白標記染色質凝聚因子 RCC1,用綠色熒光蛋白標記微管蛋白,通過熒光信號來觀察細胞內結構和分子的動態變化。
動態延時攝影:選用具有高速成像和精確控制功能的顯微鏡和攝像系統,設置合適的曝光時間、拍攝間隔等參數,對細胞進行連續拍攝,再將圖像進行疊加和處理,展現細胞分裂的連續動態過程。
高分辨率顯微成像技術:除了前面提到的 SIM、4Pi-SIM 等顯微鏡技術,還可以使用共聚焦激光掃描顯微鏡(CLSM),它通過逐點掃描和共聚焦原理,能夠獲得細胞的三維高分辨率圖像,減少背景熒光干擾,清晰觀察細胞形態和內部結構的動態變化。
細胞形態、運動和分裂過程的觀察與分析
細胞形態觀察:在細胞分裂過程中,細胞形態會發生一系列變化。例如,在有絲分裂前期,細胞會逐漸變圓,這一過程稱為有絲分裂細胞 rounding,同時細胞體積也可能發生變化。通過對細胞形態的定量分析,如計算細胞的球形度、表面積、體積等參數,可以了解細胞在不同生理狀態或外界因素影響下的形態改變。
細胞運動觀察:細胞的運動方式多樣,包括遷移、爬行、收縮等。在活細胞成像中,可以觀察到細胞在基質上的遷移軌跡、速度和方向等。例如,免疫細胞在體內的遷移對于免疫反應的發生至關重要,通過顯微動態觀察可以研究免疫細胞的遷移機制以及藥物對其遷移的影響。
細胞分裂過程觀察與分析
前期:細胞核中染色質開始凝聚形成染色體,染色體逐漸變短變粗,核仁漸漸解體消失,細胞兩極的 centrosomes 開始組裝紡錘體纖維。
中期:染色體排列到紡錘體的中央,著絲點都位于細胞中央的赤道面上,此時染色體形態最清晰,是觀察染色體形態和數目的最佳時期。
后期:染色體的著絲點分裂,姐妹染色單體分離,形成兩組子染色體,分別向細胞的兩極移動,紡錘體纖維逐漸縮短,牽引染色體移動。
末期:染色體到達兩極,核膜、核仁重新出現,細胞膜從細胞的中部開始內陷,逐漸將細胞質分裂成兩個子細胞,完成細胞分裂過程。
應用案例
沖繩科學技術研究所的科學家們通過熒光標記青鳉魚受精卵中的染色質凝聚因子 RCC1 和微管蛋白,利用顯微動態觀察技術,發現了在早期胚胎的紡錘體中心部分存在一個特殊的微管密集區域,該區域比外圍的紡錘體更加穩定,且 Ran-GTP 通路對胚胎分裂早期細胞的紡錘體組裝至關重要。